CARACTERIZACIÓN Y SECUENCIAMIENTO DEL GENOMA DEL VIRUS SARS-COV-2 OBTENIDOS DE SECRECIONES RESPIRATORIAS DE PACIENTES PROCEDENTES DE LA COMUNIDAD Y DE ÁREAS CRÍTICAS DEL HOSPITAL REGIONAL LAMBAYEQUE

Fecha de registro: Martes, 02 Junio 2020 18:08
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OBJETIVOS Describir la secuencia completa del genoma del SARS-COV-2 obtenido de secreciones respiratorias procedentes de pacientes de la comunidad y de áreas críticas del Hospital Regional Lambayeque durante abril del 2020. Objetivos específicos: A. Determinar la secuencia completa de cinco genomas de SARS-COV-2 mediante el Secuenciamiento de Segunda Generacion (NGS) mediante la plataforma Illumina en secreciones respiratorias procedentes de pacientes de la comunidad y de áreas críticas del Hospital Regional Lambayeque durante Abril 2020. B.Ensamblar y analizar filogenéticamente los genomas completos de SARS-COV-2 obtenidos de secreciones respiratorias procedentes de pacientes de la comunidad y de áreas críticas del Hospital Regional Lambayeque durante Abril 2020. MATERIAL Y MÉTODOS A. Tipo y diseño de investigación. Estudio observacional descriptivo B. Población y muestra. Población. Genoma viral de los SARS-Cov-2 obtenidos de pacientes positivos con COVID-19 de la comunidad y del Hospital Regional Lambayeque, Lambayeque, Perú, durante el mes de abril del 2020. Muestra. Será no probabilística debido a limitaciones de financiamiento. Se seleccionarán a criterio de experto cinco genomas virales procedentes de muestras con alta carga viral. Muestras biológica. Serán extractos de ARN viral obtenidos de muestras clínicas (hisopados nasofaríngeos), recibidos y procesados en el Laboratorio de Biología Molecular del Hospital Regional Lambayeque durante el mes de abril del 2020. C. Recolección de datos. Secuenciamiento del genoma viral de SARS Cov-2. Los cinco extractos de ARN positivos a SARS-CoV-2 seleccionados serán enviados a la empresa biotecnológica Umbrella Genomics, con domicilio legal en la ciudad de Lima. El almacenamiento y trasporte siempre será de 2 a 6 ºC. En Umbrella Genomics se realizarán las etapas de secuenciamiento, ensamblaje y análisis filogenético. El ARN viral será usado para sintetizar el ADN complementario (cDNA) usando el kit SuperScript III Reverse Transcriptase (ThermoFisher, USA), Cebadores aleatorios N6 (N6 Random Primers), seguido de la síntesis de la segunda cadena de ADN con ADN polimerasa I (Fragmento largo - Klenow). El secuenciamiento se realizará mediante la plataforma Tecnológica Illumina. En breve, las librerías virales de cDNA serán preparadas usando el kit Nextera XT Library Prep Kit (Illumina, USA) y purificadas usando Agencourt AMPure XP beads (Beckman Coulter, USA). Las librerias de cDNA serán cuantificadas usando un espectrofotómetro NanoDrop 1000 (ThermoFisher, USA). Las librerías de ADN seran secuenciadas en la plataforma MiSeq de Illumina (Illumina, USA) usando un kit reactivo de 300 ciclos. A. Tipo y diseño de investigación Estudio observacional descriptivo B. Población y muestra Población. Genoma viral de los SARS-Cov-2 obtenidos de pacientes positivos con COVID-19 de la comunidad y del Hospital Regional Lambayeque, Lambayeque, Perú, durante el mes de abril del 2020. Muestra. Será no probabilística debido a limitaciones de financiamiento. Se seleccionarán a criterio de experto cinco genomas virales procedentes de muestras con alta carga viral. Muestras biológica. Serán extractos de ARN viral obtenidos de muestras clínicas (hisopados nasofaríngeos), recibidos y procesados en el Laboratorio de Biología Molecular del Hospital Regional Lambayeque durante el mes de abril del 2020. C. Recolección de datos Secuenciamiento del genoma viral de SARS Cov-2 Los cinco extractos de ARN positivos a SARS-CoV-2 seleccionados serán enviados a la empresa biotecnológica Umbrella Genomics, con domicilio legal en la ciudad de Lima. El almacenamiento y trasporte siempre será de 2 a 6 ºC. En Umbrella Genomics se realizarán las etapas de secuenciamiento, ensamblaje y análisis filogenético. El ARN viral será usado para sintetizar el ADN complementario (cDNA) usando el kit SuperScript III Reverse Transcriptase (ThermoFisher, USA), Cebadores aleatorios N6 (N6 Random Primers), seguido de
Id_row:
37EBF149-F123-447F-8970-680BF549DE1D
Nu_investigacion:
1257
Autores:
FRANKLIN ROMULO AGUILAR GAMBOA, HEBER SILVA DIAZ, LUIS MIGUEL SERQUEN LOPEZ, MARCO ENRIQUE MECHAN LLONTOP
Palabras_clave:
COVID-19, EPIDEMIOLOGY, SARS-COV-2, SEQUENCE ANALYSIS, RNA
Url:
https://www.ins.gob.pe/prisa/ver_investigacion.aspx?37EBF149-F123-447F-8970-680BF549DE1D

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