RESUMEN El COVID-19, enfermedad causada por el coronavirus 2 del síndrome respiratorio agudo severo (SARS-CoV-2), se ha extendido ampliamente por todo el mundo; sin embargo, hasta ahora no existen medicamentos antivirales específicos para el tratamiento de la enfermedad, lo que plantea un gran desafío para controlar y contener el virus. En este estudio proponemos investigar si el dominio RBD de la proteína Spike del SARS-CoV-2 invade las células huésped a través de una posible nueva ruta: la proteína CD147. Para ello evaluaremos la interacción entre CD147 y proteína Spike mediante inmunofluorescencia y ELISA empleando líneas celulares. Finalmente, se realizarán ensayos de inhibición de la interacción entre el Dominio RBD de la proteína Spike y la célula Vero E6, siendo los inhibidores candidatos de esta interacción obtenidos bioinformaticamente. Por lo tanto, la confirmación de esta nueva ruta CD147-Proteina Spike y sus inhibidores permitirán el desarrollo de fármacos antivirales específicos. OBJETIVOS DEL PROYECTO Objetivo general • Evaluar la contribución del receptor CD147 para la invasión del SARS-CoV-2 así como su potencial uso para el desarrollo de drogas antivirales anti COVID-19. Objetivos específicos • Determinar mediante un ensayo de inmunofluorescencia y ELISA basado en líneas celulares y proteínas virales, la interacción entre el receptor CD147 y el dominio RBD de la proteína Spike de SARS-CoV-2. • Identificar inhibidores selectivos del dominio RBD de la proteína Spike de SARS-CoV-2 que permitan el hallazgo de una terapia farmacológica para combatir el COVID-19. MATERIAL Y MÉTODOS Diseño del estudio: Diseño Experimental y de tipo aleatorio. Estudio Cuantitativo y analítico estadístico. Según el inicio del estudio en relación a la cronología de los hechos: Prospectivo Población: • Grupo de Células Vero E6 (ATCC CRL-1587). El estudio se realizará en el Servicio de Microbiología del Hospital Nacional Edgardo Rebagliati Martins, en donde se desarrollarán los ensayos de interacción entre los potenciales inhibidores (medicamentos y productor naturales) Anti-COVID19 y la línea celular Vero E6. METODOLOGÍA Esta investigación presenta 2 componentes principales: (1) Un componente computacional, basado en las estructuras cristalinas de la proteína Spike de SARS-CoV-2 (dominio RBD), que buscará evaluar la afinidad y la estabilidad de las diversas moléculas candidatas sobre esta proteína del virus. (2) Un componente biológico, buscará confirmar in-vitro, si una molécula tiene la capacidad de impedir el reconocimiento del dominio RBD del virus SARS-CoV-2 por el receptor CD147 de una célula humana. I.- A nivel computacional Nuestro grupo cuenta ya con los scripts en GROMACS y Autodock, listos para ser ejecutados y empezar a analizar de manera automática las librerías de moléculas. Se usarán las estructuras cristalizadas del dominio RBD de la proteína Spike de SARS-CoV-2 solo y en complejo con la proteína CD147. Se utilizará la capacidad de procesamiento de la super computadora con la base de datos “ZINC database” y librerías especializadas (Link librerías) (fármacos y productos naturales) las cuales serán tamizadas mediante cálculo de acoplamiento molecular (docking) con Autodock4.2 y AutodockVina1.1. La estabilidad de los complejos formados por las moléculas con mayor energía de afinidad (?G) y el receptor en estudio será evaluada mediante cálculos de dinámica molecular de al menos 1 micro segundo, usando el software GROMACS, el cual permite ser ejecutado en paralelo en una facilidad super computacional. Los 10 compuestos con mayor energía de afinidad y estabilidad serán evaluados experimentalmente (05 medicamentos y 05 productos naturales). II.- A nivel experimental El dominio RBD de la proteína Spike, será expresado mediante el sistema de expresión de baculovirus en células de insecto para que se le otorgue el patrón de glicosilación adecuado. La proteína será fusionada independien