VALOR CLÍNICO DE PRUEBA MOLECULAR POR TRANSCRIPTASA REVERSA POR PCR TIEMPO REAL Y PCR DIGITAL POR GOTAS PARA LA DETECCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE SARS-COV-2 EN PACIENTES ASINTOMÁTICOS DE COVID-19 Y EN ESTADO CONVALESCIENTE. |
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Fecha de registro: Lunes, 27 Julio 2020 21:53
RESUMEN. El SARS-CoV-2 produce COVID-19, enfermedad de transmisión respiratoria que puede producir neumonía grave, falla multiorgánica y muerte; no obstante, el 80% de pacientes presentan enfermedad no grave. El estándar del diagnóstico laboratorial del COVID-19 se realiza por técnicas moleculares: PCR en tiempo real (RT-qPCR). Esta técnica permite detectar pacientes COVID-19 positivos a partir del 4to día de enfermedad hasta fines de la segunda semana de la enfermedad, pero antes de los 4 días la prueba tiene baja sensibilidad (elevada cantidad de falsos negativos) y después de los 14 días la técnica también pierde capacidad de detección, sobre todo en pacientes mejorados ya convalecientes. En este contexto, y conocedores de las bondades de la PCR digital por gotas (RT-ddPCR) con mayor capacidad de detección y ventaja de posibilidad de cuantificar la carga viral obtenida, nos propusimos implementar y desarrollar este estudio para comparar ambas técnicas moleculares de diagnóstico del SARS-CoV-2.
OBJETIVOS.
1. DETECTAR Y DIAGNÓSTICAR MOLECULARMENTE PACIENTES ASINTOMÁTICOS (PRESINTOMÁTICOS, OLIGOSINTOMÁTICOS Y VERDADEROS SINTOMÁTICOS) Y PACIENTES CONVALESCIENTES.
2. COMPARAR LA PCR DIGITAL POR GOTAS VERSUS PCR TIEMPO REAL EN LA DETECCIÓN Y CUANTIFICACIÓN DEL SARS-COV-2.
METODOLOGÍA.
1. Identificación de casos probables y firma de consentimiento informado.
2. Toma de muestra de hisopado nasofaríngeo por técnica convencional.
3. Extracción del ARN usando un kit comercial y Trizol.
4. Desarrollo de la pruebas molecular en plataforma de RT-qPCR y RT-ddPCR
Las secuencias de los cebadores y sondas específicas para SARS-CoV-2 que serán usadas para ambas plataformas de PCR serán obtenidas de los estudios de acceso libre publicados por la OMS.
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